熒光素酶檢測(cè)試劑盒可檢測(cè)低濃度的生物分子，適用于低豐度基因或微量樣品的分析。由于光信號(hào)具有放大效應(yīng)，即使微弱的生物學(xué)變化也能被清晰捕捉并轉(zhuǎn)化為可量化的數(shù)據(jù)，提升實(shí)驗(yàn)可靠性；熒光素酶反應(yīng)通常在幾分鐘內(nèi)完成，能迅速生成穩(wěn)定的光信號(hào)。這一特性使其特別適配于實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)或高通量篩選場(chǎng)景，大幅縮短實(shí)驗(yàn)周期，提高研究效率；
 

　　相較于其他發(fā)光或熒光檢測(cè)方法，熒光素酶系統(tǒng)的本底噪聲低。這主要?dú)w功于反應(yīng)特異性強(qiáng)且無自發(fā)熒光干擾，確保信號(hào)與噪聲比處于理想范圍，降低假陽性風(fēng)險(xiǎn)；試劑盒組分經(jīng)過預(yù)優(yōu)化，用戶只需按說明混合試劑即可啟動(dòng)反應(yīng)，無需復(fù)雜設(shè)備調(diào)試。
 

　　熒光素酶檢測(cè)試劑盒的使用步驟：
 

　　1.細(xì)胞培養(yǎng)與處理
 

　　-在96孔或384孔細(xì)胞培養(yǎng)板(建議使用白板)中鋪合適密度的待測(cè)細(xì)胞，例如表達(dá)微熒光素酶報(bào)告基因的細(xì)胞，或表達(dá)分別帶有微熒光素酶大小片段的兩個(gè)蛋白以研究其相互作用的細(xì)胞。
 

　　-根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求對(duì)細(xì)胞進(jìn)行相關(guān)處理，并繼續(xù)培養(yǎng)合適的時(shí)間。
 

　　2.試劑準(zhǔn)備
 

　　-取出緩沖液，平衡至室溫；快速瞬時(shí)離心底物管10秒鐘，將內(nèi)容物收集于管底，放置在冰盒上。
 

　　-準(zhǔn)備檢測(cè)工作液：根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求確定配制的試劑量。試劑盒中的底物通常是200×濃縮液，配制時(shí)需將其加到緩沖液中，充分混勻，配制成1x的檢測(cè)工作液，且整個(gè)過程要注意避光操作。
 

　　3.儀器準(zhǔn)備與校準(zhǔn)
 

　　-使用前需對(duì)熒光檢測(cè)儀進(jìn)行校準(zhǔn)和預(yù)熱，確保儀器處于穩(wěn)定的工作狀態(tài)。依據(jù)螢火蟲熒光素酶的特性，正確設(shè)置檢測(cè)參數(shù)，如激發(fā)波長(zhǎng)、發(fā)射波長(zhǎng)、積分時(shí)間、增益等，以獲取準(zhǔn)確的熒光信號(hào)。
 

　　4.加樣操作
 

　　-取出待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)板，平衡至室溫。
 

　　-按照試劑盒說明書的要求，先加入細(xì)胞裂解液，再加入熒光素酶底物等試劑，加樣時(shí)要準(zhǔn)確、快速，避免產(chǎn)生氣泡，確保試劑之間充分混合。加樣順序和時(shí)間間隔可能會(huì)影響反應(yīng)的起始和進(jìn)程，需嚴(yán)格遵守操作規(guī)范。
 

　　5.檢測(cè)讀數(shù)
 

　　-若使用單管的熒光測(cè)定儀，為取得測(cè)定效果，樣品和測(cè)定試劑混合后到測(cè)定前的時(shí)間應(yīng)盡量控制在相同時(shí)間內(nèi)，例如30秒內(nèi)。由于溫度對(duì)酶反應(yīng)有影響，所以測(cè)定時(shí)樣品和試劑均需達(dá)到室溫后再進(jìn)行測(cè)定。